CHO(Chinese Hamster Ovary)細(xì)胞系廣泛應(yīng)用于生物制藥和基因工程研究中,尤其是用于重組蛋白的生產(chǎn)和細(xì)胞培養(yǎng)。在CHO細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)中,檢測(cè)細(xì)胞殘留DNA非常重要,以避免其他細(xì)胞系或外源DNA的污染。
對(duì)于CHO細(xì)胞的殘留DNA檢測(cè),常用的方法與293T細(xì)胞類似,主要包括以下幾種:
1. PCR檢測(cè)
PCR(聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng))是檢測(cè)細(xì)胞系DNA殘留常用的方法之一。通過設(shè)計(jì)特異性引物,可以檢測(cè)到CHO細(xì)胞的特征性基因或外源DNA。例如,可以使用CHO細(xì)胞基因(如CHO細(xì)胞的特定基因組序列)作為目標(biāo)序列,來檢測(cè)是否有CHO細(xì)胞的DNA殘留。
步驟:
提取細(xì)胞DNA。
使用針對(duì)CHO細(xì)胞DNA特征性序列的引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增。
根據(jù)PCR產(chǎn)物的大小和強(qiáng)度判斷是否有CHO細(xì)胞DNA殘留。
2. qPCR(定量PCR)
qPCR是一種定量檢測(cè)方法,能夠精確測(cè)量殘留DNA的量。使用特定的引物和探針,可以定量分析CHO細(xì)胞的DNA數(shù)量。相比傳統(tǒng)PCR,qPCR具有更高的靈敏度和精確度,適合在低濃度DNA殘留的情況下進(jìn)行檢測(cè)。
步驟:
提取細(xì)胞DNA。
使用針對(duì)CHO細(xì)胞特定基因的引物進(jìn)行qPCR。
根據(jù)熒光信號(hào)強(qiáng)度分析DNA的定量水平。
CHO細(xì)胞殘留DNA檢測(cè)可就生物制藥產(chǎn)品中不同水平含量的宿主細(xì)胞DNA殘留進(jìn)行檢測(cè)。系統(tǒng)提供:
? 經(jīng)過優(yōu)化的樣品制備,適用于從各種復(fù)雜的樣品基質(zhì)中定量回收DNA
? 采用經(jīng)考驗(yàn)的實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)進(jìn)行高靈敏度的定量檢測(cè)
? 特異針對(duì)目標(biāo)宿主細(xì)胞DNA進(jìn)行檢測(cè)
? 在預(yù)期的DNA的片段大小范圍內(nèi),結(jié)果保持良好的一致性
? 準(zhǔn)確、可靠且可重復(fù)的結(jié)果
提供下列目前常用細(xì)胞系的分析檢測(cè):
CHO、E. coli、293T(Human)
DNA殘留定量系統(tǒng)包括:
? TaqMan?引物和探針
? TaqMan?預(yù)混液
? 宿主細(xì)胞基因組DNA標(biāo)準(zhǔn)品
? 陰性對(duì)照